بررسی تاثیر دوز بالای اسید آسکوربیک بر فعالسازی مسیر نکروپتوز در رده سلولی HT29 سرطان کولون

دایر, دیان; شوکتی اشکیکی, زهرا; عباسی سمیع, کوثر

doi:10.22118/jsmj.2026.544167.3978

بررسی تاثیر دوز بالای اسید آسکوربیک بر فعالسازی مسیر نکروپتوز در رده سلولی HT29 سرطان کولون

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

دیان دایر ¹

زهرا شوکتی اشکیکی ²

کوثر عباسی سمیع ³

¹ مرکز تحقیقات سلولی مولکولی، پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران

² مرکز تحقیقات گوارش، پژوهشکده علوم بالینی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران

³ مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، پژوهشکده علوم پایه پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران

10.22118/jsmj.2026.544167.3978

چکیده

هدف: مطالعه به بررسی تاثیر دوز بالای اسید آسکوربیک بر بیان ژن های کلیدی مسیر نکروپتوز در سلول های HT-29 سرطان کولون اختصاص یافت. مواد و روش ها: سلول های HT-29 در محیط کشت DMEM-HG حاوی FBS 10% و Pen/Strep 1% کشت داده شدند و در شرایط دمای 37 درجه سانتی گراد حاوی CO2 5% انکوبه شدند. سلول ها پس از رسیدن به تراکم 90% تریپسینه شدند و با تراکم 30000 سلول در هر چاهک بصورت سه بار تکرار در پلیت های کشت دوازده خانه کشت داده شدند. سلول ها به دو گروه تقسیم شدند. گروه کنترل که تنها محیط کشت پایه دریافت میکرد و گروه تست که به مدت 3 ساعت تحت تیمار با اسید آسکوربیک 5 میلی مولار قرار می گرفت. پس از 24 ساعت محیط رویی سلول ها و رسوب سلولی جهت بررسی های بعدی جمع آوری شد. درصد آپوپتوز و نکروز به روش فلوسیتومتری و اندازه گیری فعالیت LDH به روش کینتیک انجام شد. آنالیز بیان ژن ها به روش Real time PCR صورت گرفت. آنالیز آماری با استفاده از ورژن 8 نرم افزارgraph pad prism و t-test انجام شد. نتایج: تصاویر میکروسکوپی و نتایج فلوسیتومتری موید القای نکروپتوز توسط اسید آسکوربیک بودند. بعلاوه، تیمار با اسید آسکوربیک میزان بیان ژن های کلیدی نکروپتوز و فعالیت LDH را بطور معنی دار افزایش داده بود. نتیجه گیری: دوز بالای اسید آسکوربیک می تواند بعنوان عامل فعال ساز نکروپتوز در سلول های HT- 29 مطرح باشد.

کلیدواژه‌ها

اسید آسکوربیک

نکروپتوز

سرطان کولون

رده سلولی HT-29

موضوعات

پزشکی

1.Ye K, Chen Z, Xu Y. The double-edged functions of necroptosis. Cell death & disease. 2023 Feb 27;14(2):163.[ 10.1038/s41419-023-05691-6][PMID]

2.Seo J, Nam YW, Kim S, Oh DB, Song J. Necroptosis molecular mechanisms: Recent findings regarding novel necroptosis regulators. Experimental & molecular medicine. 2021 Jun;53(6):1007-17. [10.1038/s12276-021-00634-7][PMID]

3.Yan J, Wan P, Choksi S, Liu ZG. Necroptosis and tumor progression. Trends in cancer. 2022 Jan 1;8(1):21-7. [10.1016/j.trecan.2021.09.003][PMID]

4.Long K, Gu L, Li L, Zhang Z, Li E, Zhang Y, He L, Pan F, Guo Z, Hu Z. Small-molecule inhibition of APE1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell death & disease. 2021 May 18;12(6):503. [10.1038/s41419-021-03804-7][PMID]

5.Li X, Li F, Zhang X, Zhang H, Zhao Q, Li M, Wu X, Wang L, Liu J, Wu X, Ou Y. Caspase-8 auto-cleavage regulates programmed cell death and collaborates with RIPK3/MLKL to prevent lymphopenia. Cell Death & Differentiation. 2022 Aug;29(8):1500-12. [10.1038/ s41418-022-00938-9][PMID]

6.Hannes S, Karlowitz R, van Wijk SJ. The Smac mimetic BV6 cooperates with STING to induce necroptosis in apoptosis-resistant pancreatic carcinoma cells. Cell death & disease. 2021 Aug 30;12(9):816. [10.1038/s41419-021-04014-x][PMID]

7.Wang L, Hu C, Zhao Y, Hu X. Novel smac mimetic ASTX660 (Tolinapant) and TNF-α synergistically induce necroptosis in bladder cancer cells in vitro upon apoptosis inhibition. Biochemical and biophysical research communications. 2022 Apr 30;602:8-14. [10.1016 /j.bbrc. 2022.02.053][PMID]

8.Shahsavari Z, Karami-Tehrani F, Salami S, Ghasemzadeh M. RIP1K and RIP3K provoked by shikonin induce cell cycle arrest in the triple negative breast cancer cell line, MDA-MB-468: necroptosis as a desperate programmed suicide pathway. Tumor Biology. 2016 Apr;37(4):4479-91. [10.1007/s13277-015-4258-5][PMID]

Authors retain the copyright and full publishing rights.

Published by Ahvaz Jundishapur University of Medical Science. This article is an open access article licensed under the Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 (https:// creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/).

9.Maekawa T, Miyake T, Tani M, Uemoto S. Diverse antitumor effects of ascorbic acid on cancer cells and the tumor microenvironment. Frontiers in oncology. 2022 Sep 20;12:981547. [10.3389/fonc.2022.981547][PMID]

10.Kim JE, Kang JS, Lee WJ. Vitamin C induces apoptosis in human colon cancer cell line, HCT-8 via the modulation of calcium influx in endoplasmic reticulum and the dissociation of bad from 14-3-3β. Immune network. 2012 Oct;12(5):189-95. [10.4110/in. 2012. 12. 5.189][PMID]

11.Wei X, Xu Y, Xu FF, Chaiswing L, Schnell D, Noel T, Wang C, Chen J, St. Clair DK, St. Clair WH. RelB expression determines the differential effects of ascorbic acid in normal and cancer cells. Cancer research. 2017 Mar 15;77(6):1345-56. [10.1158/0008-5472.CAN-16-0785][PMID]

12.Samie KA, Dayer D, Eshkiki ZS. Human colon cancer HT29 cell line treatment with high-dose lascorbic acid results to reduced angiogenic proteins expression and elevated pro-apoptotic proteins expression. Current Molecular Medicine. 2023 Jun 1;23(5):470-8. [10.2174/1566524022666220616141725 ][PMID]

13.Szarka A, Kapuy O, Lőrincz T, Bánhegyi G. Vitamin C and cell death. Antioxidants & redox signaling. 2021 Apr;34(11):831-44. [10.1089/ars.2019.7897][PMID]

14.Jang MS, Lee SJ, Kang NS, Kim E. Cooperative phosphorylation of FADD by Aur-A and Plk1 in response to taxol triggers both apoptotic and necrotic cell death. Cancer research. 2011 Dec 1;71(23):7207-15. [10.1158/0008-5472.CAN-11-0760][PMID]

15.Diao Y, Ma X, Min W, Lin S, Kang H, Dai Z, Wang X, Zhao Y. Dasatinib promotes paclitaxel-induced necroptosis in lung adenocarcinoma with phosphorylated caspase-8 by c-Src. Cancer Letters. 2016 Aug 28;379(1):12-23. [10.1016/j.canlet.2016.05.003][PMID]

16.Liao P-C, Lieu C-H. Cell cycle specific induction of apoptosis and necrosis by paclitaxel in the leukemic U937 cells. Life sciences. 2005;76(14):16.39-23. [10.1016/j.lfs.2004.09.021][PMID]

17.LingHu HR, Luo H, Gang L. Bufalin induces glioma cell death by apoptosis or necroptosis. OncoTargets and therapy. 2020 May 27:4767-78. [10.2147/OTT. S242567] [PMID]

18.Baek MW, Cho HS, Kim SH, Kim WJ, Jung JY. Ascorbic acid induces necrosis in human laryngeal squamous cell carcinoma via ROS, PKC, and calcium signaling. Journal of cellular physiology. 2017 Feb;232(2):417-25. [10.1002 /jcp.25438][PMID]

19.Furqan M, Abu-Hejleh T, Stephens LM, Hartwig SM, Mott SL, Pulliam CF, Petronek M, Henrich JB, Fath MA, Houtman JC, Varga SM. Pharmacological ascorbate improves the response to platinum-based chemotherapy in advanced stage non-small cell lung cancer. Redox biology. 2022 Jul 1;53:102318.