دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز مجله علمی پزشکی جندی شاپور 2252-052X 12 1 2013 03 21 mRNA Extraction from Venom Glands of Iranian Scorpion Odonthobuthus Doriae, cDNA Synthesis and Perfom PCR from OD1 by Means of Degenerative Primers تهیه cDNA از mRNA ژن OD1 استخراج شده از بافت غدة زهری عقرب ایرانی ادونتوبوتوسدوریه (Odonthobuthus doriae) 33 40 49274 FA محمد علیمرادی گروه فارماکولوژی و سم شناسی، دانشکده داروسازی، مرکز تحقیقات سم شناسی، دانشگاه جندی شاپور اهواز، ایران. امیر جلالی گروه فارماکولوژی و سم شناسی، دانشکده داروسازی، مرکز تحقیقات سم شناسی، دانشگاه جندی شاپور اهواز، ایران. حمید گله داری گروه ژنتیک، دانشکده علوم، دانشگاه شهید چمران اهواز، ایران. 0000-0001-6281-4809 فرزانه شاهین گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران. ودیعه بیگی خوزانی استادیار گروه گروه فارماکولوژی و سم شناسی Journal Article 2011 11 11 <strong>Background and Objective:</strong> Scorpion sting is a serious public health problem in different parts of Iran. The majority of the scorpion sting cases are due to <em>Buthidae</em> family. Scorpion toxin consists of different biologic active components which are encoded by individual gene. The aim of this study was to amplify of cDNA encoding a α-like neurotoxin, named OD1 from the venom gland of Iranian scorpion <em>Odonthobuthus doriae</em>. <br /><strong>Materials and Methods:</strong> the identified <em>Odonthobuthus doriae </em>scorpions wereprepared from the<em>Razi</em>vaccine and serum research<em>institute that located in Hesarak, Karaj</em><strong>.</strong> The total mRNA was prepared and purified from the venom gland by using RNA extraction kit. The cDNA library was then constructed using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) technique. <br /><strong>Results: </strong>After optimizing PCR conditions, a cDNA encoding α-like neurotoxin, named as OD1, was selectively amplified by PCR. Using degenerate and appropriate primers, an open reading frame of 264 base pair encoding the mature toxin with 64 residues was amplified from a cDNA library of <em>Odonthobuthus doriae </em>venom gland.   <br /><strong>Conclusion: </strong>The predicted amino acid sequence consist of 88 amino acid residues including a putative signal peptide of 24 residues and a mature toxin of 64 residues. <strong>زمینه و هدف:</strong> در اکثر نقاط ایران، به­ویژه مناطق مرکزی، جنوب و شمال شرقی، عقرب­زدگی یک مشکل بهداشتی جدی محسوب می­شود. بیشتر این گزش ها، ناشی از عقرب‌های خانواده بوتیده (Buthidae Family) می‌باشد. زهر عقرب دارای ترکیبات فعال بیولوژیک مختلف از جمله سموم عصبی (نروتوکسین) می‌باشد که هر کدام توسط ژن مخصوص به خود کد می‌شوند. هدف از انجام این پژوهش تکثیر cDNA کد کنندة یک نروتوکسین شبه آلفا به نام OD1 از غدة زهر عقرب ایرانی ادونتوبوتوس دوریه (<em>Odonthobuthus doriae</em><em>)</em> می‌باشد.<br /> <strong>روش بررسی:</strong> نمونه های عقرب از آزمایشگاه رفرانس عقرب مؤسسة رازی کرج تهیه و شناسایی شدند. با استفاده از کیت استخراج RNA، مجموع RNA از غدة زهری عقرب استخراج شد. پس از این مرحله، ساخت cDNA از RNA استخراجی انجام شد. به ­منظور تکثیر cDNA کد کنندة  نوروتوکسین، آغازگرهای مناسب طراحی و تهیه شد. پس از بهینه سازی شرایط PCR، و با استفاده از تکنیک نسخه یرداری معکوس (RT-PCR )، قطعة cDNA  کد کننده سم عصبی OD1 با 64 اسید آمینه تکثیر شد.<br /> <strong>یافته­ ها:</strong> با استفاده از کیت­های استخراج و تکنیک RT-PCR، قطعة cDNA  از غدة زهر عقرب ادونتوبوتوس دوریه تکثیر یافت. cDNA به­دست آمده جهت انجام کلونینگ بعدی در نظر گرفته شد.. باند مورد نظر مربوط به ژن OD1 با طول 195 bp بر روی ژل آگارز شناسایی شد.. این باند شامل 264 base pair کد کننده سم عصبی OD1 می باشد..<br />  <strong>نتیجه­ گیری:</strong> ترتیب اسید آمینه قابل پیش بینی این سم شامل 88 اسید آمینه می باشد که شامل یک سیگنال پپتید با 24 اسید آمینه و سم OD1 کامل با 64 اسید آمینه می باشد. https://jsmj.ajums.ac.ir/article_49274_f2bfe9ac5b7599f4c6dbd5b83972d4c5.pdf