دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز مجله علمی پزشکی جندی شاپور 2252-052X 16 6 2018 01 21 Recombinant Expression of SEB of Staphylococcus aureus as vaccine candidate بیان نوترکیب انتروتوکسین استافیلوکوکوس اورئوس تیپ B به عنوان کاندیدای واکسن 237120 10.22118/jsmj.2018.237120 FA سید امیر حسینی دانشجوی دکتری تخصصی نانوبیوتکنولوژی مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع )، تهران، ایران فیروز ابراهیمی استادیار، مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران شهرام نظریان استادیار، مرکز علم و فناوری زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران Journal Article 2017 07 22 Background and purpose: Staphylococcus aureus is a gram-positive cocci that causes many diseases, such as skin infections, food poisoning, risky shocks, and autoimmune disorders. Entrotoxins are the most important toxins of the bacteria. Among them, enterotoxin type B is the most common ones which is a super antigen. The aim of this study was the cloning and recombinant expression of SEB in order to achieve a stable construct for the protein production and use it as a vaccine candidate in future investigations.<br>Materials and methods: Enzymatic digestion was performed to confirm the presence of the seb gene into pET28a(+) expression vector. Recombinant expression of SEB was induced by IPTG following cloning confirmation. Then, protein purification was done under non-denaturing conditions using a nickel chromatography column. Protein confirmation was performed by Western blotting analysis.<br>Results: The results showed that the cloning of SEB in pET28a(+) vector was performed in an appropriate position between expected restriction sites. Also, SEB had a good and remarkable expression after induction by IPTG. Expressin confirmation was performed by western blotting.<br>Conclusion: Stable recombinant construct containing SEB gene was fabricated and transferred to BL21(DE3) host cells and appropriate recombinant expression of the protein was observed. So, this protein could be used in future studies as a vaccine candidate against SEB toxin of Staphylococcus aureus. زمینه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس(Staphylococcus aureus)، کوکسی گرم مثبتی است که می تواند بیماری های مختلفی چون عفونت های پوستی، مسمومیت های غذایی، شوک های مخاطره آمیز و… را به وجود آورد. از مهم ترین سموم تولید شده توسط این باکتری، سم انتروتوکسین است که انتروتوکسین نوع B یکی از معمولترین و مهم ترین توکسین های یافت شده و یک سوپر آنتی ژن می باشد. هدف از انجام این تحقیق همسان سازی و بیان این پروتئین به شکل نوترکیب جهت دستیابی به یک ساختار و منبع پایدار برای تولید آن به منظور بررسی های آینده به عنوان کاندید واکسن بود.<br>روش بررسی: واکنش های هضم آنزیمی برای تایید حضور ژن نوترکیب SEBدرون وکتور بیانی(+)pET28a انجام شد. پس از تأیید همسان سازی ژن مورد نظر، بیان پروتئین با استفاده از القاءگر مصنوعی IPTG و همچنین تخلیص تحت شرایط طبیعی با کمک ستون کروماتوگرافی نیکل(Ni-NTA) صورت پذیرفت. آنالیز وسترن بلات نیز برای تأیید پروتئین صورت پذیرفت.<br>یافته ها: نتایج نشان داد که همسان سازی ژن SEB درون وکتور pET28a(+) به شکل مناسب بین جایگاه های مربوطه صورت پذیرفته و پروتئین SEB پس از القاء، بیان مناسب و قابل توجهی را نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی SEB را شناسایی کند.<br>نتیجه گیری: ساختار نوترکیب پایدار محتوی ژن SEB تولید گردید که بیان نوترکیب قابل توجهی را نشان داد. بنابراین پروتئین SEB را می توان در مطالعات آینده برای بررسی میزان ایمن سازی علیه سم SEB مورد بررسی قرار داد.