دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز مجله علمی پزشکی جندی شاپور 2252-052X 22 1 2023 03 21 Expression and Purification of SARS CoV-2 RBD Protein in the Prokaryotic Expression System to Evaluate the IgG Antibody in the Serums of COVID-19 Recovered Cases بیان و خالص سازی پروتئین RBD نوترکیب ویروس SARS COV-2 در سیستم بیانی پروکاریوتی به منظور ارزیابی آنتی بادی IgG موجود در سرم افراد بهبودیافته از بیماری کوید 1 1 10 177925 10.61186/jsmj.2022.341969.2843 FA فاطمه حسینی گروه ویروس شناسی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران طراوت بامداد گروه ویروس شناسی دانشکده علوم پزشکی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران بهرخ فرهمند گروه آنفولانزا و سایر بیماریهای تنفسی انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران کاظم باعثی گروه هپاتیت و ایدز انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Journal Article 2022 05 12 Background and Objectives One of the most important proteins of the SARS-COV- 2 virus is S protein, which consists of S1 and S2 subunits. The most important region in subunit S1 is the receptor binding region (RBD), which plays a key role in binding to ACE receptors. The RBD is a conserved region in S protein that is the target of the immune system and the production of antibodies against the virus. Due to the importance of this region in the production of neutralizing antibodies, it can be a good candidate for vaccine development and production of diagnostic kits. Therefore, the present study aimed to assess the response rate of antibodies in the serum of recovered COVID-19 cases using recombinant RBD protein produced in the prokaryotic expression system as an inexpensive expression system. Subjects and Methods In this study, the recombinant PET22b-RBD construct was transformed to the Escherichia coli (BL21) host, and the bacterial cells were cultured in a culture medium; thereafter, protein expression was induced using isopropyl beta- D-thiogalactoside (IPTG). The expression of recombinant RBD protein was confirmed by acrylamide gel (SDS-PAGE) and Western blotting. Finally, the desired protein was extracted using a Ni-NTA column and applied in an indirect ELISA. Results In comparison with the serum of healthy individuals (cut off: 0.412), no significant increase was observed in the response of 30 serum samples to the recombinant RBD protein. Conclusion The recombinant RBD protein produced in the prokaryotic host did not respond significantly to the antibodies in the serum of recovered COVID-19 patients and cannot be used for diagnostic purposes. زمینه و هدف یکی از مهمترین پروتئینهای ویروس 2-COV–SARS پروتئین S است که از دو زیرواحد 1S و 2S تشکیل شده است. مهمترین ناحیه در زیرواحد S1 ناحیه اتصال به رسپتور ) RBD ( است که نقش کلیدی در اتصال به رسپتورهای ACE را ایفا میکند. RBD یک ناحیه حفاظت شده در پروتئین S است که هدف سیستم ایمنی و تولید آنتیبادی علیه ویروس است. باتوجه به اهمیت این ناحیه )در تولید آنتیبادیهای خنثیکننده( که میتواند انتخاب مناسبی جهت توسعه واکسن و تولید کیتهای تشخیص سرولوژی باشد، ازاین رو در این مطالعه، میزان واکنش آنتیبادیهای موجود در سرم بیماران بهبودیافته از بیماری کوید 19 با استفاده از پروتئین RBD نوترکیب تولید شده درسیستم بیانی پروکاریوت به عنوان یک سیستم بیانی ارزان قیمت بررسی شد. روش بررسی در این مطالعه سازه نوترکیب RBD-b22PET به میزبان باکتری اشرشیاکلی ) 21BL ( انتقال و سلولهای باکتری در محیط کشت داده شد. سپس بیان پروتئین با استفاده از ایزوپروپیل بتادی تیوگالاکتوزید ) IPTG ( القا شد. بیان پروتئین نوترکیب RBD با استفاده از ژل اکریل آمید ) SDS-PAGE ( و وسترن بلات به تأیید نهایی رسید. درپایان پروتئین موردنظر با استفاده ازستون نیکل استخراج و در یک سنجش الیزای غیرمستقیم استفاده شد. یافته ها در مقایسه با سرم افراد سالم ) 0.412Cut off: ( افزایش معنیداری در میزان جذب نوری 30 نمونه سرمی به پروتئین RBD نوترکیب مشاهده نشد. نتیجه گیری پروتئین نوترکیب RBD تولیدشده در میزبان پروکاریوتی واکنش قابل توجهی به آنتیبادیهای موجود در سرم بیماران بهبودیافته از خود نشان نمیدهد و نمیتوان جهت اهداف تشخیصی از آن استفاده کرد.

https://jsmj.ajums.ac.ir/article_177925_ae81dfb5f96d28cf4c1f0a4d88eb0b71.pdf