بررسی میزان آلودگی سبزیجات به اشریشیا کلی انتروهموراژیک (EHEC) به روش کشت و مولتی پلکس PCR در شهرستان اهواز

نوع مقاله: مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 کارشناس ارشد میکروبیولوژی.گروه میکروبیولوژی، دانشگاه شهید چمران اهواز، اهواز، ایران.

2 استاد گروه میکروبیولوژی.گروه میکروبیولوژی، دانشگاه شهید چمران اهواز، اهواز، ایران.

3 دانشیار گروه میکروبیولوژی.گروه میکروبیولوژی، دانشگاه شهید چمران اهواز، اهواز، ایران.

10.22118/jsmj.2018.57855

چکیده

زمینه و هدف: مطالعه حاضر با هدف تعیین آلودگی سبزیجات به اشریشیا کلی انتروهموراژیک و تعیین سویه O157H7 بعلت تولید اگزوتوکسین stx (شیگا توکسین) و اهمیت آن در ایجاد بیماری­هایی همچون کولیت هموراژیک و سندرم اورمی همولتیک در انسان صورت گرفت.
روش بررسی: در این پژوهش تعداد 256 نمونه سبزیجات تازه شامل کاهو، کلم و سبزی خوردن طی مدت 8 ماه از 4 مرکز عمده فروش سبزی در شهرستان اهواز تهیه گردید. پس از غنی سازی اولیه، کلنی های سوربیتول منفی رشد یافته بر روی محیط CT-SMAC به محیط های کشت افتراقی انتقال داده شده و با تست­های اختصاصی بیوشیمیایی به عنوان اشریشیا کلی تائید شدند. سپس سویه­های تایید شده توسط آنتی سرم­های E.coli O157:H7 بررسی گردیدند. در نهایت با مولتی پلکسPCR حضور ژن هایstx2,stx1  eaeA, hlyA  در سویه های سوربیتول منفی ارزیابی گردید.
یافته ها: در 8 نمونه (1/3%) باکتری E.coli O157 شناسایی شد و تنها 2 ایزوله بعنوان  E.coli O157:H7 تشخیص داده شدند. پس از مولتی پلکس PCR مشخص شد که 4 ایزوله حاوی ژن stx1، 2 ایزوله حاوی ژن stx2، 1 ایزوله حاوی ژن های stx1 و eaeA، 1 ایزوله حاوی ژن های stx1، eaeA و hlyA و 1 ایزوله حاوی ژن های stx1 و hlyA بود. هیچ یک از ایزوله ها حاوی هر چهار ژن نبودند.
نتیجه­ گیری: با توجه به احتمال انتقال عوامل پاتوژن خطرناکی مانند اشریشیا کلی انتروهموراژیک  توسط سبزیجات، عدم توجه به سالم سازی سبزیجات قبل از مصرف می تواند برای سلامت عمومی مشکل آفرین بوده و طغیان بیماریهای منتقله از غذا را به همراه داشته باشد.

کلیدواژه‌ها


1-Delbeke, S., Ceuppensa, S., Holvoeta, K.(2015). Multiplex real-time PCR and culture methods for detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli and Salmonella Thompson in strawberries, a lettuce mix and basilInternational. Journal of  Food Microbiology. 193:1–7.

2-Aparecida de Oliveira,M., Maciel de Souza,V., Bergamini, M., Cristina, E.(2011). Microbiological quality of ready-to-eat minimally processed vegetables consumed in Brazil . Food Control. 22(8):1400-1403. 

3-Banerjee, R., Hersh,AL., Jason Newland, J.(2011). Streptococcus pneumoniae-associated Hemolytic UremicSyndrome Among Children in North America.The Pediatric Infectious Disease Journal. 30(9):127-135.

4-AskariBadouei, M., ZahraeiSalehi, T., RabbaniKhorasgani, M., Tadjbakhsh, H., NikbakhtBrujeni, G. (2010). Occurrence and characterisation of enterohaemorrhagic Escherichia coli isolates from diarrhoeic calves. Comp Clin Pathol. 19:295–300.

5-James, L., Evoy, M., Luo,Y., Conway,W.,  Zhou, B., Feng, H .(2009). Potential of Escherichia coli O157:H7 to grow on field-cored lettuce as impacted by postharvest storage time and temperature. international Journal of Food Microbiology. 128: 506–509.

6-Tzschoppea, M.,  Martinb, A., Beutin, L.(2012). A rapid procedure for the detection and isolation of Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) serogroup O26, O103, O111, O118, O121, O145 and O157 strains and the aggregative EHEC O104:H4 strain from ready-to-eat vegetables. International Journal of Food Microbiology. 152(3):19-30.

7-Lee, CF., Liu, SC., Lue, KH., Chen, JP., Sheu, JN.(2006). Pneumococcal Pneumonia with Empyema and Hemolytic Uremic Syndrome in Children: Report of Three Cases. J Microbiol Immunol Infect. 39:348-352.

8-Pina,DG., Johannes,L.(2005). Cholera and Shiga toxin B-subunits: thermodynamic and structural considerations for function and biomedical applications. Toxicon .45: 389–393.

9-Robati, R., Gholami, S.(2013). Estimation of virulence genes of Shiga toxin producing Escherchia coli from juice purchase and vegetables in Tehran/Iran.  Journal of  Experimental Biology. 3(2):457-462.

10-UK Standards for Microbiology InvestigationsIdentification of Escherichia coli O157.(2012). Bacteriology – Identification. 22(3.2):1-18.

11-Obrig, TG.(2010). Escherichia coli shiga toxin mechanisms of action in renal disease. Toxins. 2(12): 2769-2794.

12-Welinder-Olsson, C., Kaijser, B.(2005). Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC). Scandinavian J Infect Dis . 37(6-7):405-416.

13-Li, F., Zhao, C., Zhang, W., Cui, S., Meng ,J., Wu, J.(2005). Use of  Ramification Amplification  Assay  for  Detection of  Escherichia coli O157:H7 and Other Escherichia coli Shiga Toxin- Producing Strains. J Clin Microbiol. 43: 6086 -6090.

14-Bielaszewska, M., Aldick, T., Bauwens, A., Karch, H.(2014). Hemolysin of enterohemorrhagic Escherichia coli: Structure, transport, biological activity and putative role in virulence. International Journal of Medical Microbiology. 304(5-6): 521–529.  

15-Santaniello, A., Gargiulo, A., Borrelli, L., Dipineto, L., Cuomo, A., Sensale, M.(2007). Survey of Shiga-toxin producing Escherichia coli in urban pigeons (Columba Livia) in the city of Napoli, Italy. Ital J Anim Sci . 6: 313-16.

16-Taban, BM., Aytac, SA., Akkoc, N., Akcelik ,M.(2013). Characterization of antibiotic resistance in Salmonella enterica isolates determined from ready-to-eat (RTE) salad vegetables. Braz J Microbiol. 44(2):385-391.  

17-Kim, J., Kim, S., Kwon, N., Bae, W., Lim, J., Koo, H. (2005) . Isolation and Identification of Escherichia coli O157:H7 Using Different Detection Methods and Molecular Determination by Multiplex PCR and RAPD . J Vet Sci. 6: 7-9.

18-Kargar, M., Dianati, P., Homayoon, M., Jamali, H.(2013). Isolation,Eharacterization and Antibiotic Resistance of Shiga Toxin-Producing Escherichia coli in Hamburger and Evolution of Virulence Genes stx1, stx2, eaeA and hly by Multiplex PCR. Journal of Fasa University of Medical Sciences. 31(3):208-214.

19-Kawasaki, S., Fratamico, P., Horikoshi, N., Okada, Y., Takeshita, K., Sameshima,T., Kawamoto, S. (2009) Evaluation of a Multiplex PCR System for Simultaneous Detection of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Escherichia coli O157:H7 in Foods and in Food Subjected to Freezing. Foodborne Pathogens and Disease.6(1): 81-89.

20-Ozpınar, H., Turan, B., Tekiner, IH., Tezmen, G., Gökçe ,I., Akıneden, O.(2013). Evaluation of pathogenic Escherichia coli occurrence in vegetable samples from district bazaars in Istanbul using real-time PCR. LettApplMicrobiol. 57(4):362-367.

21-Chang, W.S., Afsah-Hejri, L., Rukayadi, Y., Khatib, A., Lye, Y L.(2013). Quantification of  Escherichia coli O157:H7 in organic vegetables and chickens. International Food Research Journal. 20(2): 1023-1029.

22-Skockova, A., Karpískova ,R., Koláčková, I., Cupakova, S. (2013). Characteristics of Escherichia coli from raw vegetables at a retail market in the Czech Republic. Int J Food Microbiol. 167(2):196-201.

23-Saeed, AY., Mazin, H., Saadi,A.,  Hussein, SO. (2013).Detection of  Escherichia coli O157 in vegetables.ournal of Agriculture and Veterinary Science. 6(2):16-18.

24-Mohammadi, P. (1390). A review of the standards and practices of wastewater for irrigation. Environmental working group of the National Committee on Irrigation and Drainage: 8-1.

25-Marashi, S, Mobed, P, Jafarzadeh, N. (1387). Karun River land affected by biological factors (area of study: Karun River in the city of Ahvaz). Second Conference on Environmental Engineering.

26-Liu, C., Hofstra, N., Franz, E. (2013).  Impacts of climate change on the microbial safety of pre-harvest leafy green vegetables as indicated by Escherichia coli O157 and Salmonella spp. International Journal of Food Microbiology. 163(2-3):119–128.

27-Keraita.B., Konradsen.F., Drechsel.P. (2007).Effect of low-cost irrigation methods on microbial contamination of iettuce irrigated with untreated wastewater. Trop Med Int Healt. 12(6):15-22.

28-Farhangi, M B., Mosaddeghi, MR., Safari Sinegani, A., Mahboubi,A. (2012). nsaturated Transport of Cow Manure-Borne Escherichia Coli Through the Field Soil. J. Sci. & Technol. Agric. &Natur. Resour. Water and Soil Sci. 16(59).